在高效液相色谱中,溶剂是指用于制备流动相、溶解和输送样品的溶液。流动相是影响HPLC的性能的主要因素,它的性质必须满足HPLC测试的严格要求。在选择溶解样品的溶剂和其他与制备样品有关的溶剂时,同样也需考虑这些溶剂的性质与检测器的兼容性。
在样品的检测波长下,所选流动相的吸光度最好是A<0.2AU,特别是在梯度洗脱中,较低的吸光度意味着能获得更好的检测精度和更好的结果。但是,在等度洗脱中吸光度稍高的溶剂也是可以接受的。选用紫外检测波长低于200nm的溶剂是很罕见的,除非是用于检测那些在高于200nm波长处吸光度低的物质。
因为水在大于等于200nm波长都无紫外吸收,所以含水流动相的吸光度,等于纯溶剂的吸光度乘以流动相B溶剂的体积分数φ。例如,在215nm波长,当B为以下各种不同溶剂时,含有25%B溶剂的流动相的吸收值A分别对应:乙腈,0.00AU;甲醇,0.09AU;脱气甲醇,0.05AU;四氢呋喃,0.22AU;异丙醇,0.07AU。注意,脱气甲醇降低了氧气在纯溶剂中的浓度,导致在200~240nm波长下,吸光度降低了接近1/3。当用充氦气的方法进行流动相脱气后,由于溶剂中氧气含量的比例下降,流动相中的B溶剂吸光值也会降低。氧气在低极性溶剂(如四氢呋喃和异丙醇)中溶解度更高,因此,在实践当中,低极性溶剂的吸光值可能会比理论值更高。(理论值见<液相色谱方法开发中紫外吸收波长的选择>)
水在波长≥200nm时无吸收,这是假定水是经过严格纯化的。HPLC级水在ASTM D1193中有详细说明。在低波长中检测,有时不但会要求水中的总有机碳(TOC)低于50ppb,而且要有足够高的电阻率。
在等度洗脱中,流动相的选择通常不受RI检测器的限制。可通过选择折光率跟样品成分折光率有较大差异的流动相,从而提高检测灵敏度。基于差分测量的检测器(如:RI)不能用于梯度洗脱。因为通常情况下A、B溶剂之间的响应值相差很大。
流动相在MS接口蒸发,流动相一般由水、有机溶剂组成,挥发性添加剂的使用也很常见(添加剂不能是非挥发性缓冲剂或盐)。因为已经去除流动相,所以在LC-MS中并不存在流动相的紫外吸收,但是溶剂中不能有颗粒存在。