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梯度洗脱在反相色谱中的作用(下篇)

更新时间:2022-12-23 点击次数:1024

梯度洗脱可用于处理不能以等度洗脱分离的样品,而最常见的使用梯度的因素是多成分保留能力不同,无法在等度洗脱中全洗脱出来,或以等度方式无法达到满意的分离效果。总结下来,以下几种情况,可以采用梯度洗脱:

1、多组分样品的极性范围大,用等度无法全部洗脱的样品;

2、大分子样品;

3、改善峰峰型;

4、目标峰出峰后,短时间内提高有机相比例,洗脱强保留干扰杂质;

5、用等度洗脱无法达到分离的情况。


#01

目标峰出峰后,短时间内提高

有机相比例,洗脱强保留干扰杂质

在检测复杂成分的样品时,往往存在些强保留物质,采用等度,无法把强保留的杂质洗脱下来,一针哪怕采集再久,也会有未知杂质干扰后面进样的效果,这种情况下,可以增加梯度洗脱,使强保留成分在梯度上洗脱出来的方式来解决。

示例:


由上面三张图可见,此中药,在采用等度洗脱时,因有强保留未知杂质,连续进样,会在后面的进样出峰,干扰检测。在待测成分出峰后,增加梯度,提高有机相比例,强保留物质在当针就洗脱下来,连续进样确认,效果能wan全重现,后面进样不会出现未知干扰峰影响


#02

用等度洗脱无法达到分离的情况

有些物质,特别是结构相近的物质,等度条件下无法达到分离,而采用梯度模式,因组分在有机相变化的选择性差异,可以达到分离,这种情况下就需要采用梯度条件进行测试。

示例:



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