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案例分享 | 带你了解多肽的分离
更新时间:2022-09-14 点击次数:1403
多肽由多个氨基酸依次连接而成的化合物,氨基酸是两性化合物,具有两性离子的特性。
孔径是指硅胶球上小孔的直径。分子进入小孔,在小孔内被键合的烷基吸附,达到分离的效果。孔径小,含孔率高,比表面积大,载碳量高。分子在孔内分离,孔径大小必须和分子大小相匹配,分子必须能进入孔内,一般小分子使用80-120Å,大分子通常使用300Å,为了达到最佳分离,一般要求孔径直径是分子直径的3倍以上。
低pH减少了酸性侧链的解离,离子对试剂(比如三氟yi酸)与肽链碱性侧链作用,中和其电性,电荷的减少使多肽的疏水作用增强,碱性多肽侧链与硅醇基无法产生吸附,但离子对试剂会使得MS的离子化效率降低。Mid-Autumn Festival
色谱柱:月旭UItimate® XB-C18(2.1×100mm,5μm 300Å)。
流动相:梯度 A(0.1%三氟yi酸) B(0.1%甲酸乙腈);
柱温:40℃;
紫外检测器:220nm;
流速:0.3mL/min;
进样量:5μL。
讨论:
多肽化合物分子量大约为2000,选择120Å孔径和300Å孔径均可以达到有效保留,在实验过程中发现120Å的峰形差,分析可能是该物质在这个体系中的分子体积较大,故在300Å的柱子上峰形有了明显的改善。可见分子量可以用于选择填料孔径的参考,但不是绝对的,做多肽时建议常规孔径120Å和大孔径300Å的色谱柱都做一下尝试,选择更合适的孔径;
流动相中使用甲酸为添加剂时没有保留,选择具有离子对作用的三氟yi酸时保留良好,该体系是检测多肽时的常规shou选体系,再根据该体系下的结果进行调整。