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中药成分液相分析常见问题——前沿峰
更新时间:2022-09-05 点击次数:1054
1. 柱过载
每一根色谱柱都有其最大样品承载量,当样品量过多时会出现超载现象,包括质量过载和体积过载。
2.色谱柱损坏
色谱柱在长时间使用之后就会导致硅胶填料的溶解,柱床崩解,从而柱效降低导致峰前沿。
3.峰干扰
两个化合物共洗脱,即在大峰前有小峰出现,色谱峰没有分开。
4.样品溶剂的影响
当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰。
具体就是说,样品在色谱柱中均匀的往前移,我们通常会得到呈正态分布的的峰。当样品溶液进样后到达色谱柱的时间比较短,在未被流动相充分稀释时,由于洗脱能力比较强的样品溶剂存在,使部分样品被洗脱的速度加快,快速通过色谱柱,最终导致峰前延。
中药成分分析项目中,提取溶剂通常为乙醇、甲醇、乙酸乙酯等洗脱强度较强的溶剂,此时易发生“样品溶剂的洗脱强度远远超过流动相"的情况,为避免前延峰出现,可以用通过“流动相稀释提取液"或降低“进样体积"的方式。
色谱条件:
色谱柱:Ultimate® AKL-C18(4.6×250mm,5μm)。
流速:1.0mL/min;
流动相:甲醇:水=1:1.1;
检测波长:280nm;
柱温:30℃;
进样体积:10μL。
色谱图:
结论:牛蒡苷峰形前沿,将进样体积降低至5μL,结果如下:
结论:通过降低进样体积有效改善了牛蒡苷的峰形,结果可满足《中国药典2020版》中相关要求。