溶剂系统对RP-HPLC分离性能的影响

流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN，A：B=3：7，

色谱柱 ：UItimate^® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm。

由图谱判断8.6min峰内夹杂小峰未分开，UItimate^® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm更适合分离。

考虑不同溶剂洗脱强度不同，有机相中加入甲醇，流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=8：2，A：B=3：7。

从图谱中可以看出加入甲醇后峰明显分离。

调整有机溶剂比例，流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=7：3，A：B=3：7。

调整有机溶剂比例后可以得出10.7min和11.9min分离度增加到3.0。

优化方法，流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=7：3，A：B=4：6。

从图谱中可以看出将峰分开，分离度增大，适当的调整有机相种类及比例可以提高分离性能。