高压液相色谱柱用途原理和维护

1.进样系统 一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。

2.输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47～4.4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。

3.分离系统 该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm，内径为2～5mm，由"不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相。固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性、多孔性和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍，或者用化学法偶联各种基因或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。

 

高压液相色谱柱的维护

1、使用预柱保护分析柱；

2、尽量不超过该色谱柱的ph范围；

3、避免流动相组成及极性的剧烈变化；

4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理；

5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中；

6、压力升高是需要更换预柱的信号。